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李斯特氏菌检测

[2025-04-03] 机械设备检测

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一、核心检测项目

  1. 细菌分离与培养
    • 选择性培养基培养:通过 PALCAM 琼脂、牛津琼脂等分离目标菌(如 GB 4789.30-2022)。
    • 菌落形态观察:革兰氏阳性短小杆菌,β- 溶血环特征(如 ISO 11290-1:2017)。
  2. 生化鉴定
    • 糖醇发酵试验:鼠李糖、甘露醇等发酵能力(如 GB 4789.30-2022)。
    • 酶活性检测:过氧化氢酶、卵磷脂酶、CAMP 试验(如 SN/T 3260-2012)。
  3. 血清型分型
    • O 抗原与 H 抗原:常见血清型 1/2a、1/2b、4b 等(如 GB 4789.30-2022)。
  4. 毒力基因检测
    • 关键基因筛查hlyA(溶血素)、inlA(内化素)、plcB(磷脂酶)等(如 GB 31658.6-2021)。
  5. 药敏试验
    • 抗生素敏感性:青霉素、复方新诺明等耐药性(如 CLSI 标准)。

二、主要检测标准

  1. 国内标准
    • GB 4789.30-2022:食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法(涵盖培养、生化、血清分型)。
    • GB 31650-2021:食品中致病菌限量(规定即食食品中李斯特氏菌不得检出)。
    • GB 31658.6-2021:动物性食品中单核细胞增生李斯特氏菌风险控制规范。
    • SN/T 3260-2012:出口食品单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法(PCR 法)。
  2. 国际标准
    • ISO 11290-1:2017:食品和动物饲料微生物学 - 单核细胞增生李斯特氏菌检测与计数(第一法:检测法)。
    • ISO 11290-2:2017:第二法:计数法。
    • AOAC Official Method 993.12:食品中李斯特氏菌的检测(传统培养法)。
  3. 其他相关标准
    • 欧盟 EC 2073/2005:食品微生物标准(规定即食食品中李斯特氏菌限量)。
    • FDA BAM Chapter 10:美国食品药品监督管理局李斯特氏菌检测指南。

三、检测注意事项

  1. 样本类型
    • 食品(乳制品、即食肉类等)、环境拭子(生产设备、人员手部)、临床标本(血液、脑脊液)。
  2. 检测方法选择
    • 传统培养法:耗时 5-7 天,适合确认结果;
    • 快速检测法:PCR(24-48 小时)、ELISA(适用于大批量筛查)。
  3. 标准合规性
    • 出口欧盟需符合 ISO 11290-1 和 EC 2073/2005;
    • 国内生产需遵循 GB 4789.30-2022 和 GB 31650-2021。
  4. 第三方检测机构
    • 选择 CMA/CNAS 资质机构(如中国检验认证集团、谱尼测试)。
    • 检测周期:传统法 7-10 天,快速法 3-5 天。

四、典型检测流程

  1. 样本前处理:均质化、增菌培养(如缓冲李斯特氏菌增菌肉汤,BLEB)。
  2. 分离培养:接种选择性培养基,37℃培养 24-48 小时。
  3. 生化与血清鉴定:结合 API Listeria 试剂条、血清凝集试验。
  4. 分子生物学验证:PCR 检测毒力基因(如实时荧光定量 PCR)。
  5. 报告与判定:依据标准判定结果,出具 CMA/CNAS 报告。
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